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聚丙烯酰胺凝胶简介

发布时间:2020-06-29   作者:admin

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聚丙烯酰胺凝胶简介

  聚丙烯酰胺凝胶是一种化学合成的人工凝胶,它是由丙烯酰胺单体、以次甲基双丙烯酰胺为交联剂、经四甲基乙二胺催化、通过游离基引发聚合而成的交联聚丙烯酰胺。

聚丙烯酰胺

  聚丙烯酰胺凝胶电泳

  用聚丙烯酰胺为支持基质的电泳程序。一般说来实现聚丙烯酰胺凝胶电泳有两种类型。

  ⑴单向电泳:采用完整的蛋白质或用十二烷基硫酸钠处理的蛋白质的单向泳动,在有凝胶的平板上平行分离。

  ⑵双向电泳:首先用天然蛋白质进行分离,然后凝胶平板再用SDS处理,样品便在第二向得到分离。第一次分离了各种各样的蛋白质,因此第二向分离的是蛋白质亚基。

  主要优点是:

  ⑴合成聚合物,故重复性良好;

  ⑵分离能力好;

  ⑶通过增减丙烯酰胺单体和交联剂的浓度,可以调节凝胶的孔径大小;

  ⑷操作简便、时间短;

  ⑸化学性质稳定、机械性能好,柔软;

  ⑹在酸性或碱性缓冲液中均可进行电泳,而且可加入两性电解质进行等电点电泳,可用含电解质表面活性剂(或非电解质表面活性剂的凝胶进行电泳,亦可使两者组合进行双向电泳等等,使用范围广泛,利用价值日益提高;

  ⑺由于染色技术的进步,可以进行定量也可检测出极微量的斑点。

  变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

  变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是根据寡核苷酸的大小来分离,因此可将全长产物与不完整的短分子分开。电泳时通常每一泳道至少加1mg合成的寡核苷酸,电泳后在紫外灯下定位寡核苷酸条带,将长度正确的寡核苷酸从凝胶上切下。

  变性聚丙烯酰胺凝胶电泳原理:蛋白质或多肽与SDS结合,经热变性和二硫键的还原,形成所带负电荷相对一致的非折叠衍生物,其泳动速度主要由分子量决定。

  非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

  非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)或称为活性电泳是在不加入SDS和疏基乙醇等变性剂的条件下,对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,常用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。

  未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可以使生物大分子在电泳过程中保持其天然的形状和电荷,它们的分离是依据其电泳迁移率的不同和凝胶的分子筛作用,因而可以得到较高的分辨率,尤其是在电泳分离后仍能保持蛋白质和酶等生物大分子的生物活性,对于生物大分子的鉴定有重要意义。

  其方法是在凝胶上进行两份相同样品的电泳,电泳后将凝胶切成两半,一半用于活性染色,对某个特定的生物大分子进行鉴定,另一半用于所有样品的染色,以分析样品中各种生物大分子的种类和含量。
本文来源:聚丙烯酰胺电泳
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